慢病毒，腺病毒，以及RNAi\基因过表达专业服务

威斯腾生物技术服务中心是一家从事生命科学研究、产品开发和实验技术服务的专业机构，目前主要从事基因诊断试剂的研发以及分子生物学、细胞生物学和免疫学相关领域的技术服务。我们的宗旨是：加强学术交流，推动科研发展，科学，严谨，求实，专业。现推出如下实验技术服务：

我中心可以为广大科研朋友提供慢病毒载体构建，腺病毒载体的构建，腺病毒的扩增，包装，纯化。以及慢病毒的包装和纯化。基因的过表达，以及RNAI相关的研究。

1、慢病毒的简介：
Lentivirus是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性；能整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动物制备；但也有不同于逆转录病毒的组分和特性；比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞，更重要的是还能感染非分裂的细胞。

利用Lentivirus构建的shRNA表达载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以替代后者，另一方面，Lentivirus-shRNA载体经包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞（如原代细胞、悬浮细胞等），并且在感染后可以整合到受感细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，是制备稳定表达shRNA细胞株和进行体内实验(in vivo)的最有效手段。
目前我们能够为客户提供从载体构建到慢病毒包装纯化和检测的一站式服务； 同时公司还在高效慢病毒生产技术的基础上建立并完善了慢病毒载体制备转基因动物的实验技术。

 

2、慢病毒载体构建包装实验流程如下：

1. 根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等），构建含有外源基因或序列的重组载体；
2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒；
3. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装并收集上清液；
4. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
5. 用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度；

 用高质量的病毒液感染靶细胞，通过定量PCR或者Westenblot检测目的基因表达，也可以进一步进行稳定细胞株的筛选用于长期的功能学研究。

3、 RNAi与慢病毒载体技术服务：

近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。通过构建RNAi表达载体制备shRNA(发卡结构小干扰RNA)，已成为进行RNA干扰实验的常用手段之一。 而目前为了感染原代细胞和难感染的细胞系或者在动物水平进行RNAi，研究科学家更多的选择了慢病毒载体。在RNAi的研究中，为了感染原代细胞和难感染的细胞系，科学家开始借助于病毒载体实现RNAi；由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。

                            
                      慢病毒感染图片                                                慢病毒感染图片